Лабораторная диагностика герпесвирусных инфекций: вирусологический, иммунофлюоресцентный, цитоморфологический, серологический, ПЦР методы диагностики герпеса

Проблема заболеваний, вызванных вирусами простого герпеса (ВПГ) чрезвычайно актуальна. Инфицированность взрослого населения впг приближается к 100%. Так в 15 летнем возрасте антитела к ВПГ-1 выявляются у 75%, к ВПГ-2 у 11%. У взрослых эти показатели составляют 99% и 73%.

По статистике ВОЗ, среди вирусных заболеваний человека, уверенно занимает 2-ое место после гриппа. смертность от заболеваний вызванных ВПГ, в структуре смертности от вирусных болезней составляет 15,8% и также уступает лишь гриппу (35%).

Клиническая картина типичных герпетических поражений кожи и слизистых известна врачу любой специальности. Однако в ряде случаев диагностика герпесвирусных заболеваний затруднена.

Это связано с преобладанием хронических, нетипично протекающих форм заболевания. Так 20% больных с ВПГ-2 не имеют симптомов вообще, а в 60% случаев проявление имеют атипичные проявления. Большую проблему составляет диагностика инфекции, вызванной ВПГ, у лиц с иммунодефицитами различного происхождения (ВИЧ-инфекция, пациенты с онкологической патологией, больные получающие химиотерапию, пациенты после трансплантации).

У таких больных изменения со стороны кожи носят нетипичный характер, часто возникают поражения внутренних органов, без кожных проявлений. Особняком стоит проблема ВПГ у беременных. Так у женщин, у которых определяются антитела к ВПГ-2 угроза прерывания беременности, невынашивание беременности, многоводие встречается в 5–10 раз чаще, чем у серонегативных беременных.

Кроме того, при первичном заражении ВПГ-2 перед родами риск заражения ребенка составляет до 75%, что приводит к рождению ребенка с врожденной герпетической инфекцией, имеющей тяжелое течение, без специфической терапии, приводящей часто к летальному исходу.

Все это обуславливает необходимость применения специфических методов диагностики инфекций вызванных ВПГ, что позволит вовремя назначить специфическую противовирусную терапию. Практический врач должен ответить на вопрос: «Какой материал сдать на анализ и какой метод применить?»

1. Вирусологический метод

Состоит в выделении вируса в культуре чувствительных тканей (куриные эмбрионы, фибробласты). Является до сих пор «золотым стандартом» в диагностике вирусных инфекций. Обладает высокой (85%-100%) чувствительностью и 100% специфичностью. Однако, дороговизна, техническая сложность и длительность исследования (от 2 до 14 дней) существенно ограничивают его применение в практическом здравоохранении.

2. Иммунофлюоресцентный метод

Основан на определении антигенов ВПГ в биологическом материале, обработанном предварительно специфическими сыворотками, дающим специфическое свечение при микроскопии. Специфичность данного метода составляет 90%, чувствительность 55–75%.

3. Цитоморфологический метод

Заключается в проведении световой микроскопии специально окрашенных мазков их биологического материала. При герпетической инфекции выявляют характерные гигантские клетки (клетки Тцанка) и внутриядерные включения. Метод дешевый и быстрый, но обладает низкой (60%) чувствительностью.

4. Серологический метод

Основан на определении антител (Ig) классов М и G к ВПГ методом ИФА. Является, наверное, самым «популярным» на сегодняшний день методом, предлагаемым коммерческими лабораториями для диагностики герпетических инфекций. Однако ценность данного метода, с моей точки зрения, несколько преувеличена.

Обнаружение Ig M к ВПГ, как правило, свидетельствует об остром заражении, либо о реактивации хронической инфекции, однако Ig M к ВПГ могут определяться короткий промежуток времени, либо циркулировать в крови 1–3 месяца и более, что затрудняет интерпретацию этого показателя. IgG к ВПГ определяются в крови при второй половине инфекционного процесса при острой инфекции, при латентной, при обострении хронической герпетической инфекции.

Причем титр (концентрация) антител не всегда коррелирует с выраженностью клинических проявлений. Латентное течение герпетической инфекции может сопровождаться высоким титром IgG к ВПГ, так и выраженные клинические проявления могут сопровождаться низким титром антител. Может быть полезным двукратное исследование IgG к ВПГ с интервалом в 7–10 дней — 4-кратное и более нарастание титра антител свидетельствует об остром процессе.

5. ПЦР (полимеразная цепная реакция)

Метод основан на определении ДНК ВПГ, полученным в процессе многократного копирования (амплификации) участка вирусного генома. Обладает очень высокой чувствительностью (98%) и специфичностью (94%). Но высокая точность данного метода определяет его недостатки. Возможны ложноположительные результаты, связанные с контаминацией (загрязнением) лабораторного оборудования от предыдущих постановок. Кроме того обнаружение ДНК возбудителя латентной инфекции в биоматериале не позволяет определить остроту процесса. Ложноотрицательные результаты мотельные результаты мо гут быть связаны с неправильным забором, хранением и транспортировкои материала на исследование, либо с использованием некачественных реактивов.

Таким образом, несмотря на большое количество лабораторных методов, диагностика инфекций, вызванных ВПГ является сложной задачей и должна проводиться с использованием нескольких методов, с учетом клинической картины заболевания.

doclvs.ru